白蛋白生产工艺

（Kistler-Nistchmann法分离白蛋白的工艺）

白蛋白Kistler-Nistchmann分离法是Chon法的改进方法，也是目前国际上常用的低温乙醇血浆蛋白分离法。

根据Kistler-Nistchmann法制作人血白蛋白的工艺步骤如下：

上图所示：

1、将混合血浆的温度调至0±0.5℃。滴加预冷的95%的乙醇，边加边搅拌，使血浆中乙醇浓度达到8%，滴加完后继续搅拌1小时，并使温度逐渐下降至-2℃，再进行固液相分离，所得上清液为上清I。沉淀I主要成分为：纤维蛋白原、Ⅷ因子、冷不溶球蛋白（纤维结合蛋白）等。

2、将所需pH4.0醋酸缓冲液和95%乙醇一起滴入上清I中，使其pH调至5.80±0.05、乙醇浓度提高至19%。在滴加过程中，上清I的温度应迅速从-2℃降至-5℃左右。滴加完，在此温度中继续搅拌，然后进行固液相分离，所得沉淀A留待分离免疫球蛋白，所得上清A继续分离。沉淀A（组分Ⅱ+Ⅲ）主要成分为：IgG、IgM、IgA、ß球蛋白、凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ等。

3、量取上清容量后，在pH 5.80的条件下，滴加95%乙醇使其浓度达到40%，温度由-5℃降至-7℃。滴加完后继续搅拌2小时以上，然后进行固液相分离，得到上清Ⅳ。沉淀Ⅳ-4和Ⅳ主要成分为：废弃杂蛋白部分（运铁蛋白质、ɑ-1脂蛋白及少量白蛋白。

4、在搅拌下滴加1M醋酸和乙醇混合物至已知容量的上清Ⅳ，调节pH至4.80±0.05，并保持其乙醇浓度不变。滴完后在-8℃下继续搅拌8小时以上，然后进行固液相分离，收集沉淀为沉淀C（粗白蛋白）。

5、称得沉淀C的重量后，用计算量的0℃无热原蒸馏水溶解，使其溶解液中的乙醇浓度在10%。在0～-3℃条件下，搅拌1小时以上，待沉淀Ⅴ全部溶解，用澄清滤板过滤，以除去杂志。用0.5M碳酸钠调节澄清后的白蛋白pH5.2-5.5。用 超滤去除乙醇。

6、校正蛋白浓度为20g/dl，加入辛酸钠做保护剂，每克白蛋白为0.16mmol,10g/dl碳酸钠调节pH至6.8±0.4.将此白蛋白液放在60℃水浴中，加热10小时。取出后澄清过滤，然后在无菌室进行除菌过滤、分装轧盖。

7、将分装后的白蛋白液放入30 ℃ 恒温室内保温14天。对保温后的白蛋白逐瓶进行灯检，剔除澄清度不合格者，即可得到精制白蛋白。